理解Bradford蛋白质测定公式:全面指南

理解布拉德福德蛋白质测定方程

布拉德福德蛋白质测定法是一种快速准确的光谱分析方法，用于测定溶液中蛋白质的浓度。这里是详细解释：

• C布拉德福德-是蛋白质的浓度-(mg/mL)。
• A595-是样品在-595-nm-处的吸光度读数。
• A空白-是空白样品（无蛋白质）的吸光度读数。
• k-是从标准曲线得到的斜率-(mg/(mL-*-吸光度))。

使用参数：示例和解释

假设你有一个样品溶液，然后你把它放在分光光度计中。在-595-nm-处记录的吸光度为-0.5，空白样品的读数为-0.1。从-BSA-标准曲线得到的斜率（k）为每吸光度单位-0.2-mg/mL。将其代入我们的方程，蛋白质浓度 C布拉德福德 的计算结果如下：

C布拉德福德 = (0.5 0.1) / 0.2 = 2 mg/mL

输出：

• C布拉德福德 = 蛋白质浓度 (mg/mL)

线性范围和准确性

请记住，布拉德福德测定法具有已知的线性范围（通常在 1 100 µg/mL 蛋白质之间）。超出此范围，准确性会降低，结果可能会不一致。这意味着斜率 k 应在使用标准蛋白如牛血清白蛋白（BSA）进行控制设置时精确确定。

数据验证和实验条件

必须保证所有数值在适当范围内，以获得准确结果。偏差，如使用非 595 nm 的波长，可能会显著偏差结果。

• 测量 A595 在插入样品之前应将分光光度计归零。
• 确保正确准备 根据需要稀释样品，使其处于可测量范围内。

常见问题 (FAQs)

• 问： 什么会干扰布拉德福德测定读数？
  答： 洗涤剂和高浓度还原剂会干扰测定。应包括适当的对照以获得准确测量。
• 问： 标准曲线可以重复使用吗？
  答： 为了可靠性，每次进行测定时都应生成新的标准曲线。

总结

布拉德福德蛋白质测定方程是生物化学中用于确定溶液中蛋白质浓度的宝贵工具。需要考虑的关键因素包括准确的标准曲线生成和正确的吸光度测量。

Tags: 生物化学, 蛋白质分析, 实验室技术