Понимание уравнения метода Брэ́дфорда́ для определения концентрации белка: всеобъемлющее руководство

Вывод: нажмите рассчитать

Формула: Cbradford = (A595 - Ablank) / k

Понимание уравнения анализа белка по Брэдфорду

Анализ белка по Брэдфорду — это быстрая и точная спектроскопическая аналитическая процедура, используемая для измерения концентрации белка в растворе. Вот разбивка:

Использование параметров: примеры и интерпретации

Представьте, что у вас есть раствор образца, и вы поместили его в спектрофотометр. Поглощение при 595 нм было зарегистрировано на уровне 0,5, а для холостого раствора оно составило 0,1. Наклон стандартной кривой BSA (k) составляет 0,2 мг/мл на единицу поглощения. Подставив это в наше уравнение, концентрация белка Cbradford будет рассчитана следующим образом:

Cbradford = (0,5 - 0,1) / 0,2 = 2 мг/мл

Выход:

Линейный диапазон и точность

Помните, что анализ Брэдфорда имеет известный линейный диапазон (обычно от 1 до 100 мкг/мл белка). За пределами этого диапазона точность снижается, и результаты могут быть непоследовательными. Это означает, что наклон k следует точно определять в контролируемой установке с использованием стандартного белка, такого как бычий сывороточный альбумин (БСА).

Проверка данных и экспериментальные условия

Для получения точных результатов важно, чтобы все значения находились в соответствующих диапазонах. Отклонения, такие как использование длины волны, отличной от 595 нм, могут значительно исказить результаты.

Часто задаваемые вопросы (FAQ)

Резюме

Уравнение анализа белка Брэдфорда является бесценным инструментом в биохимии для определения концентрации белка в растворе. К критическим факторам, которые следует учитывать, относятся точное создание стандартной кривой и правильные измерения поглощения.

Tags: Биохимия, протеиновый анализ, Лабораторные методы