Освоение Bradford Protein Assay Calculation для точного количественного определения белка

Введение-в-расчет-белкового-анализа-по-Брэдфорду

Белковый-анализ-по-Брэдфорду-—-это-быстрый-и-точный-метод-определения-концентрации-белков-в-растворе.-Этот-метод-основан-на-связывании-красителя-Coomassie-Brilliant-Blue-с-белками,-что-приводит-к-изменению-цвета,-которое-можно-измерить-с-помощью-спектрофотометра.-Степень-изменения-цвета-прямо-пропорциональна-концентрации-белка.

Понимание-формулы

Формула,-используемая-для-расчета-концентрации-белка,-следующая:

• absorbance:-Значение-поглощения,-измеренное-при-595-нм-с-использованием-спектрофотометра.
• intercept:-Перехват-по-оси-y-на-стандартной-кривой,-полученный-во-время-анализа,-обычно-полученный-из-линейного-регрессионного-анализа.
• slope:-Наклон-стандартной-кривой,-также-полученный-из-линейного-регрессионного-анализа.

Результат,-proteinConcentration,-выражается-в-микрограммах-на-миллилитр-(мкг/мл).

Пример-расчета

Давайте-рассмотрим-пример,-чтобы-увидеть,-как-работает-расчет-на-практике:

• Предположим,-у-нас-есть-следующие-данные-из-завершенного-белкового-анализа-по-Брэдфорду:
• absorbance-=-0,75
• intercept-=-0,1
• slope-=-1,5

Используя-формулу,-мы-можем-рассчитать-концентрацию-белка:

Это-приводит-к-следующему-результату:

Пример-из-реальной-жизни

Рассмотрим-исследовательскую-лабораторию,-где-ученые-работают-над-количественной-оценкой-количества-белка-в-различных-лизатах-клеток.-Они-проводят-белковый-анализ-по-Брэдфорду-и-обнаруживают,-что-поглощение-для-одного-из-их-образцов-составляет-0,65.-По-данным-предыдущих-экспериментов,-они-знают,-что-перехват-равен-0,08,-а-наклон-равен-1,4.-Подставляя-эти-значения-в-нашу-формулу:

Это-приводит-к-следующему-результату:

Этот-быстрый-и-точный-измеритель-помогает-исследователям-продолжать-свои-эксперименты,-обеспечивая-корректность-концентраций-белка.

Общие-проблемы-и-обработка-ошибок

Существуют-несколько-распространенных-проблем,-которые-могут-возникнуть-при-проведении-белкового-анализа-по-Брэдфорду:

• Неправильное-построение-стандартной-кривой:-Убедитесь,-что-вы-готовите-и-измеряете-свои-стандарты-точно.
• Помехи-от-других-веществ:-Будьте-осторожны-с-веществами,-которые-могут-вмешиваться-в-анализ,-такими-как-детергенты.
• Ошибки-измерения:-Убедитесь,-что-спектрофотометр-правильно-откалиброван-и-работает-корректно.

Часто-задаваемые-вопросы-(FAQ)

Q:-Что-делать,-если-мое-значение-поглощения-выходит-за-пределы-диапазона-стандартной-кривой?

A:-Разведите-свой-образец-так,-чтобы-его-поглощение-находилось-в-пределах-диапазона-стандартной-кривой,-а-затем-пересчитайте-концентрацию.

Q:-Могу-ли-я-использовать-другую-длину-волны-для-анализа-по-Брэдфорду?

A:-Белковый-анализ-по-Брэдфорду-специально-разработан-для-измерения-поглощения-при-595-нм.-Использование-другой-длины-волны-может-привести-к неточным результатам.

Q: Как мне обеспечить точность моей стандартной кривой?

A: Готовьте свежие стандарты каждый раз, когда проводите анализ, и измеряйте их точно. Используйте несколько повторений и усредняйте результаты.

Tags: Биохимия, Анализ белка, Лабораторные Методы