Dominar a Cálculo do Ensaio de Proteína de Bradford para Quantificação Precisa de Proteína

Introducao-ao-Calculo-do-Ensaio-de-Proteinas-de-Bradford

O-Ensaio-de-Proteinas-de-Bradford-é-um-método-rápido-e-preciso-para-determinar-a-concentração-de-proteínas-em-uma-solução.-Esta-técnica-é-baseada-na-ligação-do-corante-Coomassie-Brilliant-Blue-às-proteínas,-o-que-leva-a-uma-mudança-de-cor-que-pode-ser-medida-usando-um-espectrofotômetro.-O-grau-de-mudança-de-cor-é-diretamente-proporcional-à-concentração-de-proteínas.

Entendendo-a-Fórmula

A-fórmula-usada-para-calcular-a-concentração-de-proteínas-é:

• absorbancia:-O-valor-de-absorbância-medido-a-595-nm-usando-um-espectrofotômetro.
• intercepto:-O-intercepto-no-eixo-y-da-curva-padrão-gerada-durante-o-ensaio,-tipicamente-obtido-de-uma-análise-de-regressão-linear.
• inclinacao:-A-inclinação-da-curva-padrão,-também-obtida-da-análise-de-regressão-linear.

O-resultado,-concentracaoDeProteina,-é-expresso-em-microgramas-por-mililitro-(µg/mL).

Exemplo-de-Cálculo

Vamos-passar-por-um-exemplo-para-ver-como-o-cálculo-funciona-na-prática:

• Suponha-que-temos-os-seguintes-dados-de-um-Ensaio-de-Proteinas-de-Bradford-concluído:
• absorbancia-=-0.75
• intercepto-=-0.1
• inclinacao-=-1.5

Usando-a-fórmula,-podemos-calcular-a-concentração-de-proteínas:

Isso-resulta-em:

Exemplo-da-Vida-Real

Considere-um-laboratório-de-pesquisa-onde-cientistas-estão-trabalhando-na-quantificação-da-quantidade-de-proteína-em-vários-lisados-celulares.-Eles-realizam-um-Ensaio-de-Proteinas-de-Bradford-e-encontram-a-absorbância-de-uma-de-suas-amostras-como-sendo-0.65.-De-experimentos-anteriores,-eles-sabem-que-o-intercepto-é-0.08-e-a-inclinação-é-1.4.-Substituindo-esses-valores-na-nossa-fórmula:

Isso-resulta-em:

Esta-medição-rápida-e-precisa-ajuda-os-pesquisadores-a-prosseguir-com-seus-experimentos,-garantindo-que-estão-trabalhando-com-as-concentrações-de-proteínas-corretas.

Problemas-Comuns-e-Lidando-com-Erros

Existem-alguns-problemas-comuns-que-podem-surgir-ao-realizar-um-Ensaio-de-Proteinas-de-Bradford:

• Geracao-incorreta-da-curva-padrão:-Certifique-se-de-preparar-e-medir-seus-padrões-com-precisão.
• Interferência-de-outras-substâncias:-Esteja-atento-a-substâncias-que-possam-interferir-no-ensaio,-como-detergentes.
• Erros-de-medição:-Certifique-se-de-que-o-espectrofotômetro-esteja-devidamente-calibrado-e-funcionando-corretamente.

Perguntas-Frequentes-(FAQs)

P:-E-se-meu-valor-de-absorbância-estiver-fora-do-intervalo-da-curva-padrão?

R:-Diluia-sua-amostra-para-que-sua-absorbância-caia-dentro-do-intervalo-da-curva-padrão-e,-em-seguida,-recalcule-a-concentração.

P:-Posso-usar-um-comprimento-de-onda-diferente-para-o-Ensaio-de-Bradford?

R:-O-Ensaio-de-Proteinas-de-Bradford-foi-especificamente-projetado-para-medir-a-absorbância-a-595-nm.-Usar-um-comprimento-de-onda-diferente-pode-levar-a-resultados-imprecisos.

P:-Como-posso-garantir-a precisão da minha curva padrão?

R: Prepare padrões frescos sempre que realizar o ensaio e meça os com precisão. Use múltiplos replicados e calcule a média dos resultados.

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