Pemahaman perhitungan uji protein Bradford untuk kuantifikasi protein yang akurat

Pengenalan-Penghitungan-Assay-Protein-Bradford

Assay-Protein-Bradford-adalah-metode-cepat-dan-akurat-untuk-menentukan-konsentrasi-protein-dalam-larutan.-Teknik-ini-didasarkan-pada-pengikatan-pewarna-Coomassie-Brilliant-Blue-ke-protein,-yang-menyebabkan-perubahan-warna-yang-dapat-diukur-menggunakan-spektrofotometer.-Tingkat-perubahan-warna-ini-berbanding-lurus-dengan-konsentrasi-protein.

Memahami-Rumusan

Rumus-yang-digunakan-untuk-menghitung-konsentrasi-protein-adalah:

• absorbansi:-Nilai-absorbansi-yang-diukur-pada-595-nm-menggunakan-spektrofotometer.
• intercept:-Titik-potong-y-dari-kurva-standar-yang-dihasilkan-selama-pengujian,-biasanya-diperoleh-dari-analisis-regresi-linier.
• slope:-Kemiringan-dari-kurva-standar,-juga-diperoleh-dari-analisis-regresi-linier.

Hasilnya,-proteinConcentration,-dinyatakan-dalam-mikrogram-per-mililiter-(µg/mL).

Contoh-Penghitungan

Mari-kita-melalui-contoh-untuk-melihat-bagaimana-penghitungan-ini-bekerja-dalam-praktik:

• Misalkan-kita-memiliki-data-berikut-dari-Assay-Protein-Bradford-yang-selesai:
• absorbansi-=-0.75
• intercept-=-0.1
• slope-=-1.5

Menggunakan-rumus,-kita-dapat-menghitung-konsentrasi-protein:

Hasilnya-adalah:

Contoh-Kehidupan-Nyata

Pertimbangkan-lab-penelitian-di-mana-para-ilmuwan-bekerja-untuk-mengukur-jumlah-protein-dalam-berbagai-lisat-sel.-Mereka-melakukan-Assay-Protein-Bradford-dan-menemukan-absorbansi-untuk-salah-satu-sampel-mereka-adalah-0.65.-Dari-eksperimen-sebelumnya,-mereka-tahu-bahwa-intercept-adalah-0.08-dan-slope-adalah-1.4.-Memasukkan-nilai-nilai-ini-ke-dalam-rumus-kita:

Hasilnya-adalah:

Pengukuran-cepat-dan-akurat-ini-membantu-peneliti-melanjutkan-eksperimen-mereka,-memastikan-bahwa-mereka-bekerja-dengan-konsentrasi-protein-yang-benar.

Masalah-Umum-dan-Menangani-Kesalahan

Ada-beberapa-masalah-umum-yang-dapat-timbul-saat-melakukan-Assay-Protein-Bradford:

• Kesalahan-generator-kurva-standar:-Pastikan-bahwa-Anda-menyiapkan-dan-mengukur-standar-Anda-dengan-akurat.
• Gangguan-oleh-zat-lain:-Perhatikan-zat-yang-dapat-mengganggu-pengujian,-seperti-detergen.
• Kesalahan-pengukuran:-Pastikan-bahwa-spektrofotometer-dikalibrasi-dengan-benar-dan-berfungsi-dengan-baik.

Pertanyaan-Umum-(FAQ)

P:-Bagaimana-jika-nilai-absorbansi-saya-berada-di-luar-rentang-kurva-standar?

J:-Encerkan-sampel-Anda-sehingga-absorbansinya-berada-dalam-rentang-kurva-standar-dan-kemudian-hitung-ulang-konsentrasinya.

P:-Bisakah-saya-menggunakan-panjang-gelombang-yang-berbeda-untuk-Assay-Bradford?

J:-Assay-Protein-Bradford-dirancang-khusus-untuk-mengukur-absorbansi-pada-595-nm.-Menggunakan-panjang-gelombang-yang-berbeda-dapat-menyebabkan-hasil-yang tidak akurat.

P: Bagaimana saya memastikan keakuratan kurva standar saya?

J: Siapkan standar segar setiap kali Anda melakukan pengujian dan ukur dengan akurat. Gunakan beberapa ulangan dan rata rata hasilnya.

Tags: biokimia, Uji Protein, Metode Laboratorium