ब्रैडफोर्ड प्रोटीन परख समीकरण को समझना: एक व्यापक मार्गदर्शिका

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सूत्र: Cbradford = (A595 - Ablank) / k

ब्रैडफोर्ड प्रोटीन परख समीकरण को समझना

ब्रैडफोर्ड प्रोटीन परख एक तीव्र और सटीक स्पेक्ट्रोस्कोपिक विश्लेषणात्मक प्रक्रिया है जिसका उपयोग किसी घोल में प्रोटीन की सांद्रता को मापने के लिए किया जाता है। यहाँ इसका विवरण दिया गया है:

मापदंडों का उपयोग: उदाहरण और व्याख्याएँ

कल्पना करें कि आपके पास एक नमूना समाधान है, और आपने इसे एक स्पेक्ट्रोफोटोमीटर में रखा है। 595 एनएम पर अवशोषण 0.5 दर्ज किया गया था, और रिक्त स्थान के लिए, यह 0.1 था। बीएसए मानक वक्र (k) से ढलान 0.2 मिलीग्राम/एमएल प्रति अवशोषण इकाई है। इसे हमारे समीकरण में डालने पर, प्रोटीन सांद्रता Cbradford की गणना इस प्रकार की जाएगी:

Cbradford = (0.5 - 0.1) / 0.2 = 2 mg/mL

आउटपुट:

रैखिक सीमा और सटीकता

ध्यान रखें कि ब्रैडफ़ोर्ड परख की एक ज्ञात रैखिक सीमा होती है (आमतौर पर प्रोटीन के 1-100 µg/mL के बीच)। इस सीमा से परे, सटीकता कम हो जाती है, और परिणाम असंगत हो सकते हैं। इसका मतलब यह है कि ढलान k को मानक प्रोटीन जैसे बोवाइन सीरम एल्ब्यूमिन (बीएसए) का उपयोग करके नियंत्रित सेटअप में सटीक रूप से निर्धारित किया जाना चाहिए।

डेटा सत्यापन और प्रायोगिक स्थितियाँ

सटीक परिणाम प्राप्त करने के लिए सभी मानों को उचित सीमाओं के भीतर रखना आवश्यक है। विचलन, जैसे कि 595 एनएम के अलावा किसी अन्य तरंगदैर्ध्य का उपयोग करना, परिणामों को महत्वपूर्ण रूप से विकृत कर सकता है।

अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न (FAQs)

सारांश

ब्रैडफोर्ड प्रोटीन परख समीकरण एक समाधान में प्रोटीन सांद्रता निर्धारित करने के लिए जैव रसायन विज्ञान में एक अमूल्य उपकरण है। विचार करने के लिए महत्वपूर्ण कारकों में सटीक मानक वक्र निर्माण और सही अवशोषण माप शामिल हैं।

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